Biotechnologies (STL) · Première · 4 – Réaliser un dénombrement de micro-organismes présents dans un produit biologique
Dénombrer les micro-organismes
Combien de germes par gramme ?
En bref
Un produit alimentaire ou une eau est conforme si sa charge microbienne reste sous un seuil.
Un produit alimentaire ou une eau est conforme si sa charge microbienne reste sous un seuil. Il faut donc savoir combien de micro-organismes il contient par gramme ou par millilitre : c’est le dénombrement.
Deux méthodes au programme
| Méthode | Principe | Compte | Avantages et limites |
|---|---|---|---|
| Numération directe au microscope (hématimètre) | on compte les cellules dans un volume connu | cellules totales, vivantes et mortes | rapide ; ne distingue pas les cellules viables ; il faut des cellules assez grosses (levures, micro-algues) |
| Dénombrement après culture en milieu solide | chaque cellule viable donne une colonie | cellules revivifiables (UFC) | plus long (incubation) ; seules les cellules capables de se multiplier sont comptées |
La numération à l’hématimètre
Un hématimètre (cellule de Malassez, de Thoma…) est une lame creusée d’une chambre de profondeur connue et gravée d’un quadrillage : chaque rectangle correspond à un volume précis. On compte les cellules dans plusieurs rectangles, on fait la moyenne, puis on divise par le volume.
Exemple : cellule de Malassez, un rectangle = 0,01 µL = 10⁻⁵ mL. On compte en moyenne 40 levures par rectangle dans une suspension diluée au 1/10. Concentration = 40 / 10⁻⁵ × 10 = 4 × 10⁷ cellules par mL.
Le dénombrement après culture
- Préparer la suspension mère : peser l’échantillon (par exemple 10 g) et l’ajouter à 90 mL de diluant : suspension au 1/10.
- Réaliser des dilutions décimales en série : 1 mL de la suspension + 9 mL de diluant donne 10⁻², et ainsi de suite.
- Ensemencer un volume exact (souvent 1 mL en profondeur, ou 0,1 mL en surface) de plusieurs dilutions.
- Incuber, puis compter les boîtes qui ont un nombre de colonies exploitable (en général entre 15 et 300 environ).
Chaque colonie provient d’une cellule ou d’un petit amas : on exprime le résultat en UFC (unités formant colonies).
Le calcul
N = n / (V × d), où N est la concentration en UFC par mL (ou par g), n le nombre de colonies, V le volume ensemencé en mL, d le facteur de dilution de la suspension ensemencée (par exemple 10⁻³).
Exemple : 1 mL de la dilution 10⁻³ ensemencé donne 150 colonies. N = 150 / (1 × 10⁻³) = 1,5 × 10⁵ UFC par mL (ou par g si la suspension mère est rapportée au gramme). On arrondit à deux chiffres significatifs.
Interpréter
Le résultat est comparé à un critère microbiologique, c’est-à-dire une valeur de référence réglementaire : par exemple un nombre maximal de germes par gramme d’un aliment. Au-delà, le produit est non conforme. Les méthodes officielles sont normalisées : même milieu, même température, même durée d’incubation, pour que deux laboratoires trouvent des résultats comparables.
Pièges fréquents
- Oublier de multiplier par l’inverse de la dilution.
- Compter une boîte trop chargée (colonies confluentes) ou trop pauvre (peu représentative).
- Changer de pipette entre chaque dilution est indispensable : sinon on transporte des cellules en trop.
Teste-toi
6 questions pour vérifier
Touche une réponse : la correction s’affiche tout de suite.
1.La numération à l’hématimètre compte…
2.Que signifie UFC ?
3.1 mL de suspension + 9 mL de diluant donne une dilution au…
4.On ensemence 1 mL de la dilution 10⁻² et on compte 80 colonies. La concentration est…
5.On ensemence 0,1 mL de la dilution 10⁻³ et on compte 50 colonies. La concentration est…
6.Quelles boîtes retient-on pour le calcul ?
0 / 6 questions
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La fiche de révision, sur une page
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