Biotechnologies (STL) · Première · 1 – Observer la diversité du vivant à l’échelle microscopique
Le microscope optique, l’état frais et la coloration de Gram
Voir l’invisible, bien réglé et coloré.
En bref
Une bactérie mesure environ un micromètre : pour la voir, il faut un microscope optique bien réglé et une préparation adaptée.
Le microscope optique
Le grossissement total est le produit du grossissement de l’oculaire et de celui de l’objectif : oculaire × 10 et objectif × 40 donnent × 400.
| Objectif | Grossissement total (oculaire × 10) | Usage |
|---|---|---|
| × 10 | × 100 | repérer la préparation, cellules végétales |
| × 40 | × 400 | levures, cellules sanguines, état frais |
| × 100 à immersion | × 1 000 | bactéries sur frottis coloré |
La démarche d’utilisation :
- Allumer, placer l’objectif le plus faible.
- Poser la lame, centrer la préparation.
- Mettre au point avec la vis macrométrique, puis micrométrique.
- Passer à l’objectif supérieur en ne touchant plus qu’à la vis micrométrique.
- Pour l’objectif × 100, déposer une goutte d’huile à immersion : elle évite la déviation de la lumière entre la lame et la lentille.
Le champ microscopique (la zone vue) rétrécit quand le grossissement augmente.
L’état frais
On dépose une goutte de suspension (culture liquide ou colonie diluée dans de l’eau physiologique) sous une lamelle, sans coloration. On observe des cellules vivantes : forme, taille approximative, groupement, et surtout mobilité (une bactérie mobile traverse le champ ; une bactérie immobile ne fait que trembler, c’est le mouvement brownien).
La coloration de Gram
C’est une coloration différentielle : elle sépare les bactéries en deux groupes selon leur paroi.
- Frottis : étaler, sécher, fixer à la chaleur.
- Violet de gentiane : toutes les bactéries sont violettes.
- Lugol (mordant) : fixe le violet.
- Alcool (décoloration) : l’étape critique.
- Fuchsine ou safranine (contre-coloration).
| Résultat | Paroi | Couleur finale |
|---|---|---|
| Gram positif | épaisse couche de peptidoglycane, retient le violet | violet |
| Gram négatif | peptidoglycane fin + membrane externe, se décolore | rose |
L’étape de décoloration est le point critique : trop longue, des Gram positif deviennent roses ; trop courte, des Gram négatif restent violets. On valide avec des souches témoins connues.
Dessiner une observation
Un dessin d’observation est fidèle (on dessine ce qu’on voit, pas ce qu’on sait), au crayon, avec un titre, une échelle ou le grossissement, et des annotations reliées par des traits horizontaux. Un schéma, lui, simplifie pour expliquer.
Mesurer une cellule
Avec un oculaire micrométrique étalonné, ou le quadrillage d’un hématimètre de dimensions connues, on compte le nombre de graduations occupées par la cellule. Exemple : une graduation vaut 2,5 µm à × 400 ; une levure couvre 3 graduations : elle mesure environ 7,5 µm.
Teste-toi
6 questions pour vérifier
Touche une réponse : la correction s’affiche tout de suite.
1.Oculaire × 10 et objectif × 40 : quel grossissement total ?
2.L’huile à immersion s’utilise avec l’objectif…
3.Un état frais permet surtout d’observer…
4.Après une coloration de Gram, une bactérie Gram positif apparaît…
5.Quelle étape de la coloration de Gram est la plus critique ?
6.Quel réactif sert de mordant dans la coloration de Gram ?
0 / 6 questions
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