Biotechnologies (STL) · Première · 2 – Cultiver des micro-organismes
Milieux de culture, ensemencement et colonies
Nourrir, semer, puis observer les colonies.
En bref
Cultiver un micro-organisme, c’est lui fournir ce dont il a besoin pour se multiplier.
Cultiver un micro-organisme, c’est lui fournir ce dont il a besoin pour se multiplier. Le choix du milieu et des conditions dépend de ses besoins nutritionnels et de son type trophique.
Les besoins nutritionnels
Tout micro-organisme a besoin d’une source d’énergie, d’une source de carbone, d’eau, d’azote et de sels minéraux.
| Type trophique | Source d’énergie | Source de carbone | Exemple |
|---|---|---|---|
| Chimio-organotrophe | oxydation de molécules organiques | organique (glucose) | E. coli, levures |
| Photolithotrophe (photoautotrophe) | lumière | minérale (CO₂) | micro-algues, cyanobactéries |
Un micro-organisme non exigeant pousse sur un milieu simple ; un micro-organisme exigeant a besoin de facteurs de croissance (vitamines, acides aminés).
Les types de milieux
| Milieu | Rôle | Comment le reconnaître |
|---|---|---|
| Ordinaire | faire pousser la plupart des bactéries | composition simple (peptones, extrait de viande) |
| D’isolement | obtenir des colonies séparées | milieu solide (gélose) |
| Sélectif | ne laisser pousser qu’un groupe | contient des agents inhibiteurs (sels biliaires, cristal violet, antibiotique) |
| D’orientation | distinguer des groupes par un caractère | contient un substrat fermentescible (lactose) et un indicateur de pH |
Sur un milieu d’orientation lactosé, une bactérie qui fermente le lactose acidifie le milieu : l’indicateur de pH change de couleur autour de ses colonies.
Les conditions physico-chimiques
- Température : la plupart des bactéries étudiées sont incubées à 37 °C (ou 30 °C) ; les levures à 25-30 °C.
- pH : souvent proche de 7 pour les bactéries, plus acide pour les levures et moisissures.
- Concentration en NaCl : quelques bactéries (staphylocoques) tolèrent un milieu très salé, ce qui sert à les sélectionner.
- Dioxygène : aérobie stricte, anaérobie stricte, aéro-anaérobie facultative ; on le teste en gélose profonde.
Ensemencer
- Milieu liquide : on y dépose un inoculum ; sa densité peut être ajustée à l’aide d’un étalon de Mac Farland (comparaison de la turbidité).
- Milieu solide : isolement par la méthode des quadrants (stries successives) : l’anse dilue progressivement l’inoculum, et dans le dernier quadrant chaque cellule isolée donne une colonie.
On note sur chaque boîte (sur le fond, pas le couvercle) : nom, date, milieu, souche — c’est la traçabilité. Puis on incube, boîte retournée (couvercle en bas) pour éviter que la condensation ne tombe sur la gélose.
Décrire une colonie
Une colonie est un amas visible de cellules issues d’une seule cellule (ou d’un petit groupe). On la décrit par : taille, forme, contour (régulier, dentelé), relief (bombé, plat), aspect (lisse, rugueux), couleur, opacité.
Une culture est pure si toutes les colonies ont le même aspect. Une colonie différente des autres signale un contaminant.
Exemple
Un produit laitier est ensemencé sur une gélose ordinaire et sur une gélose sélective des bactéries Gram négatif, lactosée avec indicateur. Sur la gélose ordinaire poussent de nombreux types de colonies ; sur la gélose sélective, seules quelques colonies, dont certaines entourées d’un virage de couleur : ce sont des bactéries Gram négatif lactose positif.
Teste-toi
6 questions pour vérifier
Touche une réponse : la correction s’affiche tout de suite.
1.Une micro-algue qui utilise la lumière et le CO₂ est…
2.Un milieu sélectif contient…
3.Sur un milieu lactosé avec indicateur de pH, le virage de couleur autour d’une colonie signifie…
4.Une colonie est…
5.À quoi sert l’isolement par stries en quadrants ?
6.Pourquoi incube-t-on les boîtes retournées ?
0 / 6 questions
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