Biotechnologies (STL) · Première · 2 – Cultiver des micro-organismes
Travailler en asepsie et stériliser
Rien n’entre, rien ne sort.
En bref
Des micro-organismes sont partout : sur la paillasse, dans l’air, sur la peau.
Des micro-organismes sont partout : sur la paillasse, dans l’air, sur la peau. Pour cultiver uniquement celui qu’on étudie, il faut travailler en asepsie avec du matériel stérile.
Quelques définitions
| Terme | Sens |
|---|---|
| Stérile | exempt de tout micro-organisme vivant |
| Aseptique | qui empêche l’apport de micro-organismes extérieurs |
| Stérilisation | procédé qui rend un objet stérile (tous les micro-organismes, spores comprises) |
| Désinfection | élimination de la plupart des micro-organismes d’une surface inerte |
Les micro-organismes environnementaux se révèlent facilement : une gélose laissée ouverte à l’air, touchée avec un doigt ou frottée sur une poignée de porte se couvre de colonies après incubation.
Organiser le poste en zone d’asepsie
- Désinfecter la paillasse.
- Allumer le bec Bunsen : il crée autour de sa flamme une zone d’asepsie (environ 15 à 20 cm) où les courants d’air chaud éloignent les particules.
- Disposer tout le matériel à portée de main, dans la zone.
- Ouvrir les tubes et boîtes le moins longtemps possible, près de la flamme, en tenant le bouchon dans la main.
- Flamber l’anse métallique avant et après usage ; flamber l’ouverture des tubes.
- Ne jamais poser un bouchon ou une pipette stérile sur la paillasse.
Le travail aseptique protège dans les deux sens : la culture contre les contaminants, et le manipulateur contre la culture.
Les procédés de stérilisation
| Procédé | Conditions | Pour quoi |
|---|---|---|
| Autoclave (chaleur humide sous pression) | 121 °C, environ 20 min (barème usuel) | milieux de culture, verrerie, déchets contaminés |
| Four Pasteur (chaleur sèche) | 170 à 180 °C, 1 h ou plus | verrerie vide |
| Filtration | membrane de pores 0,22 µm | liquides thermosensibles (vitamines, antibiotiques, certains sucres) |
| Flambage | flamme | anses, ouvertures de tubes |
| Irradiation | rayons gamma, industriel | boîtes et pipettes en plastique à usage unique |
L’autoclave fonctionne avec de la vapeur d’eau sous pression : à pression supérieure à la pression atmosphérique, l’eau bout au-dessus de 100 °C. On y repère le manomètre (pression) et le barème (couple température-durée). Seul le personnel habilité le fait fonctionner.
Préparer un milieu stérile
Un milieu de culture est préparé (pesée de la poudre, dissolution, chauffage pour une gélose), réparti en tubes ou en flacons, puis autoclavé. Un composé thermosensible, stérilisé à part par filtration, est ajouté après refroidissement.
Le niveau de confinement
Le risque biologique détermine le niveau de confinement : on n’ensemence au lycée que des souches de groupe 1 (parfois 2), dans un laboratoire de niveau adapté, avec élimination des cultures en DASRI après autoclavage.
Teste-toi
6 questions pour vérifier
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1.Stérile signifie…
2.La zone d’asepsie autour d’un bec Bunsen s’étend sur environ…
3.Quel est le barème usuel de l’autoclave ?
4.Comment stériliser une solution de vitamines sensible à la chaleur ?
5.On flambe l’anse métallique…
6.On peut poser le bouchon d’un tube stérile sur la paillasse pendant l’ensemencement.
0 / 6 questions
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