Biochimie, biologie et biotechnologie (STL) · Terminale · T6 – Détecter et caractériser les biomolécules
Immunotechniques : agglutination, précipitation et ELISA
L’anticorps, outil de détection.
En bref
Un test de grossesse, un autotest, un groupage sanguin : dans chacun, un anticorps reconnaît sa cible avec une précision extrême.
Un test de grossesse, un autotest, un groupage sanguin : dans chacun, un anticorps reconnaît sa cible avec une précision extrême. Au laboratoire, on se sert de cette spécificité pour détecter et même doser.
Identifier les acteurs
Dans toute procédure, repère :
- l’antigène (ce qu’on cherche, ou ce qu’on utilise pour capter l’anticorps) ;
- l’anticorps (spécifique) ;
- le système de révélation (agglutinats visibles, arc de précipitation, couleur).
Une réaction antigène-anticorps est spécifique : un anticorps ne se fixe que sur son épitope.
L’agglutination
L’antigène est particulaire (bactérie, globule rouge, bille de latex). Les anticorps, à deux bras, relient plusieurs particules : des agglutinats visibles à l’œil nu apparaissent.
- Groupage sanguin : des globules rouges du groupe A s’agglutinent au contact d’anticorps anti-A.
- Sérogroupage bactérien : une souche de salmonelle agglutine avec le sérum qui reconnaît ses antigènes de surface.
La précipitation et l’immunodiffusion
L’antigène est soluble. Antigène et anticorps diffusent dans un gel ; là où ils se rencontrent en proportions équivalentes, ils forment un réseau insoluble : un arc de précipitation.
- Double diffusion d’Ouchterlony : antigènes et sérum dans des puits face à face ; l’allure des arcs (fusion, croisement) compare les antigènes.
- Immunodiffusion radiale : l’anticorps est dans le gel, l’antigène diffuse depuis un puits ; le diamètre de l’anneau dépend de la concentration en antigène. Avec une courbe d’étalonnage, on dose.
Trop d’antigène ou trop d’anticorps empêche le réseau de se former : le précipité n’apparaît qu’à la zone d’équivalence.
L’ELISA
Une technique immuno-enzymatique en microplaque. Exemple, ELISA « sandwich » pour détecter un antigène :
- Un anticorps de capture est fixé au fond du puits.
- On ajoute l’échantillon : l’antigène se fixe. Lavage.
- On ajoute un conjugué : un second anticorps couplé à une enzyme. Lavage.
- On ajoute un substrat chromogène : l’enzyme le transforme en produit coloré.
La couleur n’apparaît que si l’antigène est présent ; son intensité, mesurée au spectrophotomètre, permet de doser.
Pour chercher des anticorps du patient (sérodiagnostic), on fixe l’antigène au fond, puis on révèle avec un conjugué anti-immunoglobuline humaine.
Anticorps de captureantigèneanticorps conjuguésubstratcouleur
Les témoins et les points critiques
| Témoin | Il vérifie que… |
|---|---|
| Positif (d’efficacité) | les réactifs fonctionnent : il doit réagir |
| Négatif | il n’y a pas de réaction parasite : il ne doit pas réagir |
| De spécificité | la réaction est due à l’antigène recherché et non à un autre |
Points critiques : les lavages (sinon le conjugué resté libre colore tout), les concentrations, le temps et la température d’incubation.
Exemple travaillé
En ELISA, les puits d’un patient sont jaunes, le témoin négatif incolore, le témoin positif jaune. Les témoins sont validés : le patient possède l’antigène recherché. Si le témoin négatif était jaune aussi, le test serait invalide (lavages insuffisants, par exemple).
Teste-toi
6 questions pour vérifier
Touche une réponse : la correction s’affiche tout de suite.
1.L’agglutination suppose un antigène…
2.Des globules rouges qui s’agglutinent avec un sérum anti-B appartiennent au groupe…
3.L’arc de précipitation se forme…
4.En immunodiffusion radiale, le diamètre de l’anneau permet de…
5.Dans un ELISA, le conjugué est…
6.Pourquoi les lavages sont-ils des points critiques de l’ELISA ?
0 / 6 questions
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